肖后军　陶克艳　郭安国　洪齐（湖北省畜牧局，湖北　430064）
李勇　向隆寿　周绍东　阎秉焕（湖北省波尔山羊种羊场，湖北　443315）

摘　要：波尔山羊是世界上著名的肉用山羊品种，有“肉羊之父”美誉。本试验采取的技术路线是：用激素对经产的波尔母羊进行超数排卵，发情后用纯种波尔公羊配种，手术法从输卵管中冲出发育至2-4细胞的胚胎，检胚后再经手术移到同期发情的受体的输卵管内，“借腹怀胎”，用B超仪进行早期妊娠诊断。结果：1、对11只波尔母羊（供体）进行超排， 8只共采到109枚胚胎，3只未采到胚胎，超排有效率为72.7%，平均采胚数为13.6±6.1枚（按8只供体计算，下同），109枚胚胎中1枚为8细胞（细胞用C表示，下同），44枚为4C，31枚为2C，33枚为1C；2、移植受体56只，35-45天B超检查，29只妊娠，26只未孕，1只可疑（按未孕计），妊娠率为51.8%；3、对170只受体分3批进行同期发情处理，平均的同期发情率为87%。
关键词　　波尔山羊、同期发情、超数排卵、胚胎移植、受体、B超检查

　　山羊的胚胎移植试验早在1949年就取得了成功，但直到1980年后才开始步入商业化、产业化运作。应用超排胚移（英文简称MDET）技术可以迅速扩繁优良畜种、减少引种风险、增大同卵双胎和多胎的机会，加快群体选择强度，在畜牧生产上具有特别重大的意义。波尔山羊原产于南非，因其适应性广、抗病力强、生长速度快、胴体品质好、屠宰率高，特别是杂交改良本地山羊效果显著而深受欢迎，供不应求。本试验在孙长美教授等专家的亲自指导和具体帮助下，采用同期发情、超数排卵、胚胎移植、B超早期妊娠诊断等核心技术，旨在探索和建立一条实用的技术路线，快速扩繁纯种波尔山羊。
　1 材料与方法
试验动物：供体为1999年湖北省波尔山羊种羊场从澳大利亚引进的纯种波尔山羊，种公羊要求精子活力在0.7以上，母羊为2-5岁的经产的未孕母羊；受体为从安徽引进的大西羊、本地选留的马头山羊。试验前对供体要观察1-2个情期，对受体要进行隔离检疫。供、受体均要求体质健壮、无遗传性及传染性疾病，繁殖机能正常。特别注意，受体应是35 kg以上的经产的未孕母羊。
　　试验所用激素及主要药品：氯前列烯醇（PG，上海产），促卵泡激素（FSH，宁波产），促卵泡激素释放因子（LRH，上海产），F-10（Gibcobrl，81200-040），M16（sigma，M1285），静松林（2%，长春产），兽用破抗（上海产），青霉素（人用，华北产），链霉素（人用，华北产），氯化钠注射液（人用，湖北产）等。
　　试验所需主要器械：恒温培养箱、体视解剖镜、水浴锅、灭菌锅、集卵皿、培养皿、移卵管、注射器、针头以及外科手术所需的解剖刀、止血钳、缝针、缝线、创布、敷料、消毒药品等。
试验地点、时间：试验地点在湖北省波尔山羊种羊场，时间为2001年5月1日-7月5日。
　　1.2 方法
1.2.1 本试验采用的技术路线见胚胎移植工作流水线

第13天给受体肌注PG，手术后35-45天对受体进行B超检查。

　　1.2.2 波尔山羊的超数排卵与受体的同期发情　采用PG同步（1-2ml/只）、FSH超数排卵（供体采用FSH减量处理法，肌注总剂量为150-250IU）、LRH促排卵。
　　1.2.3 波尔山羊的配种　波尔母羊发情后（有部分羊不一定有明显的发情表现），对其进行选配，发情好的羊采用本交，发情不很明显的羊采用人工授精，均配3次，每次间隔8-12h，注意每只母羊只能用同一只优秀的公羊进行配种，否则后代系谱就会失真。
　　1.2.4 供、受体的麻醉　供、受体均采用静松林麻醉，肌肉注射，每只0.8-3ml。麻醉后记录其呼吸、心跳频率。
　　1.2.5 采胚与移胚
　　1.2.5.1 采胚时间：在第一次配种后48-60h进行采胚。
　　1.2.5.2 术前准备：把麻醉了的供体仰面固定在手术架上，将手术部位（乳房前腹中线部，两条乳静脉之间）剪净毛茬，用2-4%的碘酒消毒，再用70-75%的酒精脱碘。
　　1.2.5.3 采胚：将准备好了的供体推入手术室，采用手术的方法，打开腹腔，将子宫、输卵管、卵巢拉出，用F-10（含5%BSA）冲卵液从输卵管内冲出胚胎。记录卵巢的大小与颜色、卵巢上排卵点、冲出胚胎数。
　1.2.5.4 术后处理：采胚结束后，用37℃灭菌生理盐水（加入80万IU青霉素/250ml生理盐水）湿润母羊子宫，冲去凝血块，将器官复位。缝合后，在伤口周围涂上碘酒，肌注破抗1500单位，肌注青霉素80万IU、链霉素100万IU。将羊松绑抬下手术架，观察、记录苏醒时间。手术后3天内每天肌注青霉素80万IU、链霉素100万IU，防止创口感染。
　　1.2.5.5 检胚、培养与移植：在检胚室内（恒温37℃），将采集到的胚胎放在体视解剖镜下进行检查，记录回收的胚胎数量及发育情况，将检好的胚胎移入装有温度在37℃的培养液（M16）的培养皿内，放入恒温培养箱（37.1℃），备用。采用手术的方法，用移卵管将检过的2枚胚胎移植到受体的输卵管内（受体的术前准备同供体，移植时将胚胎移入卵巢发育比较好的一侧输卵管内）。受体的术后处理同供体。
　　1.2.6 对受体进行B超妊娠检查：在胚胎移植后35-45天内对受体进行直肠法B超检查，初步判断受体的妊娠情况。对阳性者，重点加强饲养管理，保证充足的营养供应；对阴性者，按常规饲养，留作下次的受体。
　　1.2.7 供体母羊的发情配种：术后若供体母羊发情，即可配种，配种后按常规饲养。

　　2 试验结果

　　2.1 受体的同期发情：分3批，同期发情率分别为80%（40/50）、93.3%（56/60）、86.7%（52/60），平均为87%。
　　2.2 波尔山羊的超排效果：8只供体中发情好的6只，不明显的2只；卵巢发育好的1只，较好的5只，差的2只。卵巢发育好的6376号，排卵点多（16个），冲卵数也多（24枚）；卵巢发育差的排卵点少，冲卵数也少（蓝38号8枚、816号7枚）。8只供体平均采胚13.8±6.1枚。详见表一。
　　2.3 胚胎发育、移植及B超诊断：8个供体共采胚109枚，其中31枚1C、16枚2C、60枚4C、2枚8C，分别占28.5%、14.7%、55%、1.8%；共移植受体56只，其中移1C的16只，移2C的8只，移4C的30只，移8C的2只；56只受体中B超诊断妊娠的29只，未孕的27只，可疑的1只，妊娠率为51.8%。详见表二。
　　2.4 供、受体的麻醉：波尔山羊注射静松林（2%）平均为0.05ml/Kg体重，麻醉后平均呼吸频率、心跳频率分别为18.1次/分、76次/分，约40分钟后完全苏醒。受体羊注射静松林的剂量平均为0.04ml/Kg体重，麻醉后平均呼吸频率、心跳频率为18.5次/分、74.0次/分，约1.5h后完全苏醒。

表1 - 波尔山羊的超排效果

　　3.1 波尔山羊的超排效果：本试验分3批在5月1日-27日进行，7月5日B超诊断。经激素处理的11头波尔母羊发情配种后，11只供体只有8只采集到了胚胎，超排有效率为72.7%。8只供体共采胚109枚，平均为13.8±6.1枚，比预计的平均采胚数（16枚以上）要低，主要是由于供体已过最佳自然繁殖季节造成的。在今后开展胚移时，要尽量安排在当年9月至下年2月期间进行。一方面，波尔山羊处于自然繁殖高峰季节，可作供体的羊只多，且发情、排卵较稳定；另一方面，不耽搁供体术后的发情、配种，如果在5、6月份进行，由于7、8月份高温，波尔山羊处于发情淡季，往往推延供体的繁殖周期。

表2 胚胎的发育情况及移植、B超诊断结果

3.2 供、受体的麻醉：波尔山羊以0.05ml/Kg体重的剂量麻醉，手术过程中，羊能安静、心跳频率平稳，效果较好。对供体0.04ml/Kg体重的麻醉量，还应降低，以1ml/只为宜。
3.3 B超早期妊娠诊断：B超诊断为阳性的受体，应加强管理；为阴性的则不能轻易抛弃，因为B超诊断只有95%左右的准确率。
　　胚胎妊娠率：从表二可以看出，胚胎发育至1-8C移植时，妊娠率最高的为4C，达32.1%（18/56），2C的次之，为12.5%，1C的为7.1%，移植8C的2只受体均未孕。在以后采用本技术路线开展波尔山羊的胚胎移植工作时，要注意观察供体的发情，适时配种，估算好手术采胚时间（即从第一次配种到手术时间隔多长时间），以利胚胎在供体体内的良好发育（至2C或4C），提高胚胎质量和胚胎妊娠率。